猪冷冻精液在规模化猪场中的应用实践
猪冷冻精液在规模化猪场中的应用实践
摘要：阐述了猪冷冻精液的发展简史及在养猪业生产中的的实际应用价值及其局限性，着重表述了从冻精保存，稀释液的配制，冻精的解冻，冻精的稀释至用于配种的整个过程，及冷冻精液在规模化猪场中实践应用过程中的操作情况和效果。
关键词：猪；冷冻精液；实践应用
猪的人工授精技术已经广泛应用于畜牧业生产，所用精液多为常规液态保存精液，但液态精液不便于远距离运输，不能充分利用优良的种公猪，所以人们的视线逐渐转移到冷冻精液上。猪冷冻精液技术是指利用干冰（-79℃）、液氮（-196）、液氦（-269℃）等作冷却源，将精液特殊处理后冷冻，保存在超低温的液氮（196℃）状态下，达到长期保存的目的，并且解冻后输精的过程。自Polge等自1956年开始猪的冻精研究试验以来，许多国家相继开展了此项技术的研究，目标是提高它的繁殖成绩，达到现实生产可接受的水平。我国养猪业已从传统到副业型转变到效益型，专业化的瘦肉产品生产，猪的常温液态保存精液技术已经被大面积的推广和应用到养猪生产实践中。精液冷冻保存是人工授精的一项重大变革，不但解决了精液长期保存的问题，有利于本地猪种资源保护，还使精液不受时间、地域的限制，便于开展省际、国际之间的协作，提高优良种猪的利用率；而且极大地延长了种猪基因物质的使用寿命，使优良种猪在短期进行后裔测定，保留和恢复精液供应、血统更新、引种降低生产成本等方面均有重要意义。随着全国性、区域性种猪联合育种工作的深入开展，猪的冷冻精液技术研究越来越显得迫切。
1、猪精液冷冻技术研究简史
从意大利人Spallanzani最早开始研究哺乳动物精液冷冻开始至己有200多年的历史 。猪的精液冷冻研究是从1949年英国人Polge等发现甘油(丙三醇)对牛精子具有抗冻保护作用后开始的。1956年，他首次报道了应这个原理进行猪精液的冷冻操作，并进行人工授精。1957年Hess等将猪冻精经子宫颈输入，并产下仔猪。1975年，Pursel等发明了简便的猪精液冷冻和解冻方法，从此打开猪冷冻精液的商品化之路。
2、猪精液冷冻保存的意义
由于冻精可以使优良基因得到无限期的保存（如本地猪种资源保护），延长公猪使用年限，而不受该公猪死亡、损失、采精间隔或繁殖不育的限制，有利于人为地使用高性能水平的种公猪与较多数量的母猪配种，获得更大的遗传进展。取代活体公猪的引进，使种猪选择扩大到世界范围的各群体进行成为可能，不受时间和地理位置差异的限制，引进国外高性能公猪冻精取代活体公猪，可节省外汇支出。生物安全的保证，有利于人工授精体系的完善，公猪冷冻精液可以在后裔测定或疾病检测后才开始大量供应，为稳定的遗传发展和严格的生物安全提供额外保障。从健康角度考虑，冻精为疾病检测提供了足够的时间，冻精还为大型的人工授精站爆发疾病时提供了稳定的精液供应保障。
4、冻精解冻及应用的实践操作
4.1 冻精解冻所需设备和材料
冻精稀释粉（SGI购买）、蒸馏水、输精瓶（有刻度、容量至少为80ml）、烧杯或塑料杯（无菌、1～2L容量）、恒温水浴锅、计时器、长钳子或大镊子、纸巾、剪刀、精确温度计。
4.2 冻精稀释液的配制
将蒸馏水预热至30℃～34℃后加（为所购买冻精配制的稀释粉）稀释粉（一包可配制1L的稀释液），充分搅拌或用磁力搅拌器混匀，在室温条件下，待稀释液20～40分钟稳定化。稳定化后的稀释液分装到12个带有刻度的容量至少为80ml的塑料输精瓶中，每瓶至少80ml，然后在输精瓶上标明稀释液的配制日期。用完的烧杯等材料都要用清水洗涤干净后，再用蒸馏水漂洗6次，最后煮沸或用干燥箱灭菌，保存以待下次使用。配制好的稀释液如当天未能用完可放在5℃条件下保存或-20℃条件下保存。
将当天配制的或冷冻保存的稀释液调至20℃，上下可以浮动1℃。同时将恒温水浴锅内的蒸馏水调至50℃，上下可以浮动1℃。如操作过程中使用的是普通温度计，因普通温度计存在±2以上的误差，所以一定要使用精确水银温调正。
4.3 冻精的解冻
将液氮罐靠近解冻用的恒温水浴锅或其他解冻设备，这样能够尽量缩短冻精管从液氮罐转至解冻设备过程中处于室温下的时间。将液氮罐内装有冻精的提桶提升到液氮罐颈部上方能够用钳子将冻精管取出为宜，用长钳子或大镊子迅速取出一管（1头粉）精液，当提桶内还保存有其它冻精时，避免冻精管离开液氮环境并暴露于室温环境不要超过5秒，否则将导致精液质量下降。在快速将冻精管从液氮罐取出的同时，需要核查公猪的编号是否正确，快速将冻精管放入50℃蒸馏水的水浴锅中，冻精管在水浴锅中的时间需要使用秒表计时45秒，快速取出。解冻时无需用手或工具拿着冻精管；如同时需要解冻1管以上冻精，须确保水浴温度维持50℃稳定。如解冻时发生密封球弹出冻精管，致使冻精管爆裂，需废弃此管冻精。
图1 用长钳子快速将冻精管从液氮罐中取出#p#副标题#e#
图2 将冻精管放入50℃蒸馏水的水浴锅中计时45秒
图3 冻精管的稀释
4.4 冻精的稀释
将冻精管从水浴中取出后，可用干净的纸巾将表面的蒸馏水擦干，剪断冻精管一端的密封球并插入到20℃的稀释液瓶底，同时剪断另一端的密封球以使精液顺利快速流入瓶底，稀释完成。建议稀释时上下快速抽动冻精管避免因为精液粘稠而大量附着在管内壁而被遗弃。可以使用经预热的凝胶块或咖啡因包被的载玻片来对精液质量进行分析。
图4 冻精解冻稀释后取少量用于镜检
图5 冻精解冻稀释后应快速用于配种
5、精液配种使用
精液解冻后存放在隔热的精液保存箱内（20～27℃），及时配种使用。因解冻后精液的精子活力会随着时间的延长而下降，所以解冻1小时后将不能使用。保鲜精液输精时间为经产母猪断奶3-4天早上发现发情第二天早上配种（24小时后），配种两次间隔12小时；经产母猪断奶4-7天早上发现发情下午配种（12小时后），配种两次间隔12小时；经产母猪断奶7天以上早上发现发情立即配种，配种3次间隔12小时；后备猪早上发现发情下午配种（12小时后），配种两次间隔12小时。而冷冻精液建议输精时间根据母猪发情情况，参考冷冻精液建议输精时间，见表1。
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表1 冷冻精液建议输精时间 |
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配种母猪 |
单次输精 |
两次输精 |
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第一次 |
第二次 |
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后备母猪 |
29-32小时 |
24-29小时 |
30-34小时 |
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经产母猪 |
33-36小时 |
29-32小时 |
34-38小时 |
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注：此表中的时间是指母猪第一次静立反应后的小时数；建议两次输精。
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6、实践操作情况
6.1 液氮冻精的保存
为确保冻精保存质量和冷冻精液配种工作的顺利开展，要经常检查液氮罐的有效性，保温性能下降或性能损失时要及时停用。液氮冻精保存时要根据液氮罐的性能要求，每天定期添加液氮，确保罐内冻精不能露在液氮面外，防止因缺少液氮致使罐内温度回升而导致精子死亡。储存液氮和冻精的液氮罐应放置在阴凉、干燥、通风好的房间内；运输液氮和冻精时，严禁用如何物品将液氮罐口密闭，以免引起爆炸。
6.2 冻精稀释后镜检精子活力
冻精解冻稀释后取少量用于镜检即可，提前将用于镜检精液的玻片预热，镜检合格后立即将存放在隔热的精液保存箱内的精液拿至配种岗位配种。用预热后的玻片检查时可以观察到视野中精子从少到多的开始蠕动至游走的全过程，一分钟内会观察到镜检视野内精子全部苏醒，精子游走速度与常温稀释后保存的精液精子游走速度基本相同，精子活力为0.95～1.0。
6.2 配种及配种率
冻精解冻稀释后应快速用于配种，因解冻后精液的精子活力会随着时间的延长而下降，所以配种必须在解冻1小时内用完，稀释后越短时间内用于配种越好。配种时间宜在早晚凉爽或夜间配种。用于冻精配种的母猪应具备健康度高，发情特征明显，繁殖性能高，且是第二胎至第六胎的母猪。运用冻精配种的母猪配种后的饲养管理与常温液态人工授精母猪相同，夏季高温季节需做好防暑降温工作。
6.3 受胎及分娩情况
笔者经过近一年的猪冷冻精液在本场的应用实践，应用大白、长白、杜洛克公猪的冻精共72头份配种，其受胎率为87%，分娩后平均窝产活仔头数为7.6头（杜洛克为5.9头、大白、长白为9.1头），比鲜精配种减少18%左右。可能是笔者首次应用冻精配种，操作上以及稀释份配制上有待进一步改进，以缩小两者之间差距，提高冻精应用效果。
作者：才永娟 贺佳伟 黄如渠 邓东养 钟日聪 湛江广垦沃而多原种猪有限公司
