原标题：血清驯化防控猪蓝耳病

郭春和，刘小红，陈瑶生

中山大学生命科学学院

背景：猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS）是养猪业中最重要的传染病之一，其致病机理仍不清楚。PRRSV主要感染肺泡巨噬细胞，破坏免疫系统。该病毒具有以下特点：极易变异重组、免疫抑制性、产生中和抗体慢、病毒血症时间长，类似HIV，且目前疫苗存在不同毒株交叉保护力差、疫苗毒带毒时间长、毒力返强、与田间毒株重组、疫苗毒株种类繁多、业界争议大等问题。故通过使用本场蓝耳毒株做血清驯化来防控PRRS是目前较好的防控手段。

不同猪场蓝耳感染情况可概括为以下四种情况（如图1所示）：

1. 阳性不稳定场：应使用活疫苗，找到发病阶段，提前3-4周对生长猪群免疫

2. 阳性稳定场、暂时阴性场：不使用疫苗全群免疫，但对后备猪进行隔离驯化，监测合格后（抗原阴性）方可并群

3. 双阴性场：不使用疫苗，加强生物安全

4. 疫情爆发场：对全群母猪和后备猪普免1次，减少易感动物，缩短暴发时间；母猪配种前加强免疫1次。生长猪群，找到发病阶段，提前3-4周免疫1-2次

图1 蓝耳感染可分为四类

大部分猪场属于阳性稳定场或暂时阴性场，此时需通过血清驯化防控蓝耳。

1. 蓝耳驯化前期工作

1) 了解猪场蓝耳疫苗免疫背景：一直使用一个还是多个厂家疫苗，通过全群抽样采血检测蓝耳，并对蓝耳测序做进化树分析，掌握该猪场蓝耳流行毒株（优势毒株）；

2) 了解该猪场蓝耳、圆环抗原抗体背景：蓝耳、圆环抗体阳性率及离散度、抗原检出率，及是否有蓝耳、圆环疫情，掌握蓝耳、圆环流行情况；

3) 对猪场每个阶段猪只（配种怀孕舍、产房、保育舍、育肥舍、公猪站）按10%比例抽血，若有流产、死胎情况，需对全部流产胎儿及怀孕母猪采血检测PRRSV、ASFV、PCV2、CSFV及PRV抗原，并对PRRSV做定量分析，通过PCR、测序确定本猪场蓝耳毒株类型及数量，了解PRRS流行现状。

2. 蓝耳驯化要求

1) 封群猪场原则上100 m内无猪场；

2) 禁止使用外来PRRS阳性种公猪精液；

3) 原则上保证本场种公猪PRRSV抗原抗体双阴性；

4) 严格执行全进全出。

3. 蓝耳驯化步骤

1) 封群。根据每个月更新后备猪的数量，一次性补足6个月所需后备猪，引入的后备猪隔离单独饲养，在单独饲养的过程中使后备猪接触到本场蓝耳病病毒；

2) 通过驯化前期工作，掌握本场蓝耳流行毒株，采集本场经抗原检测蓝耳阳性猪只血清，定量分析，根据定量结果用PBS或生理盐水稀释（通常1:100），制备好驯化用血清后1 ml接种后备猪（接种前一天注射长效抗生素，或通过饲料提前一周预防性给药，防止继发感染其它细菌性传染病）；封群6个月，接种后7天定期观察猪只精神状态、有无发热等症状，多维饮水保健，6个月内禁止引入其他猪只；对于寻找蓝耳抗原阳性猪只平时多留意发热育肥猪和保育猪，有疑似蓝耳症状采血检测以备驯化用；

3) 用于驯化血清除检测PRRSV抗原外，还须检测伪狂野毒抗体，非洲猪瘟、圆环及猪瘟抗原，血清须是PRRSV抗原阳性，伪狂野毒抗体阴性，非洲猪瘟、圆环及猪瘟抗原阴性；

4) 接种血清21、42天后，采血检测PRRSV抗原，5头血清混一个样检测，若出现抗原阳性，须逐头进行检验，蓝耳抗原阳性个体不允许转入配种怀孕舍；

5) 封群处理后，不再注射PRRS疫苗，蓝耳抗原阴性（抗体可阳性）方可转入配种怀孕舍，以后每批次后备猪引进均须通过PRRS驯化；

6) 及时登记样品及猪场背景信息（如场名、样品数量、送检人、猪场信息—最近免疫时间、免疫程序、猪群疫病发生情况，将登记纸质版或电子版与血清一并送至实验室）。

4. 蓝耳驯化目的

1) 在猪群中建立本猪场蓝耳毒株的优势生态种群，净化野毒；

2) 后备猪同时感染同时消失，使后备猪同时接触本场蓝耳毒株，猪体内蓝耳病毒几乎同时消失；

3) 使后备猪接触本场蓝耳毒株，激活免疫系统，防止后期感染；

4) 使本猪场猪群健康水平稳定，提高生产成绩；

5) 一旦猪场健康稳定，停止使用蓝耳苗；

6) 没有易感动物存留以使病毒延续。

5. 蓝耳驯化注意事项

1) 有些猪场把老母猪和后备猪混群饲养驯化，这种驯化达不到蓝耳同时感染同时消失，效果不佳；

2) 对于一直使用疫苗的猪场，突然改用血清驯化，刚开始会有波动期，如后备猪流产等，需做好防御工作，但驯化好后生产很快稳定；

3) 为了达到蓝耳驯化效果，应提前做好引进后备猪的计划；

4) 在使用血清驯化前，一定要严格检测血清不带有非洲猪瘟、伪狂野毒、圆环、猪瘟等病毒，防止疾病传播；

5) 一次性补足6个月后备猪，驯化后蓝耳抗原阴性（抗体可阳性）猪只方可进入配种怀孕舍，封群驯化期间21、42天分别采血检测，驯化后最快38周可生产阴性猪；

6) 驯化后产生蓝耳双阴性猪容易，但是维持不易，生物安全等各方面措施需要到位；

7) 在驯化后产生第一批蓝耳双阴性仔猪进入保育舍前，需对保育舍全部清群并彻底消毒；

8) 蓝耳监测：保育、育肥阶段，以栏为单位，采集口腔液监测蓝耳抗原（如图2所示），防止蓝耳感染。

图2 口腔液采集

6. 案例分析

江西某猪场蓝耳驯化十多年，一直不打蓝耳苗。由于蓝耳防控到位，伪狂野毒抗体一直阴性。以下是随机抽取的保育猪血清抗体水平，蓝耳驯化后，保育猪维持蓝耳抗体阴性、伪狂野毒抗体阴性，猪瘟、口蹄疫抗体水平好。

不同批次监测育肥猪口腔液，通过蓝耳GP5基因测序发现，如图3所示，该猪场监测到的蓝耳毒株为类CH-1a/CH-1R毒株，与其同源性最高（97-98%），提示蓝耳驯化后，该猪场只存在一种毒株，达到净化野毒的目的。

图3 蓝耳毒株进化树分析、同源性比较

作者介绍

郭春和，中山大学特聘研究员，致力于PRRSV研究。以第一作者或独立通讯作者在病毒学知名期刊J Virol等发表14篇SCI；以第一发明人申报国家发明专利14项，9项已授权（转让1项），国际PCT专利2项；主持国家基金面上项目、青年基金、省基金重点项目、博士后项目等共计8项。