猪蓝耳病防控与净化技术方案
郭春和，刘小红，陈瑶生
中山大学生命科学学院
一、背景知识
猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS）是养猪业中最重要的传染病之一，其致病机理仍不完全清楚。其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）,主要感染猪肺泡巨噬细胞，破坏免疫系统。该病毒具有以下特点：极易变异重组、免疫抑制性、产生中和抗体慢、病毒血症时间长，类似HIV。且目前疫苗存在安全性不好、不同毒株交叉保护力差、疫苗毒带毒时间长、毒力返强、与田间毒株重组、疫苗毒株种类繁多、业界争议大等问题。因此，PRRS防控任重而道远，不能简单地依靠疫苗，需采取综合防控的措施。
二、国内外PRRS疫苗统计
1. 国内疫苗统计
2. 国外疫苗统计
目前我国蓝耳苗毒株有9个，生产厂家30多家，市场上PRRS疫苗仍以活苗为主，国外使用的都是活苗。灭活苗国内外专家早已证实效果不理想或无效，且活苗只对同源毒株有一定保护力，对异源毒株无保护力或保护力差。
三、PRRS净化是种猪场的必由之路
1. PRRS净化原则
1) 一般情况下，种猪场不打蓝耳苗。只有出现蓝耳感染导致猪群不稳定，才免疫蓝耳苗，后期通过疫苗免疫后，猪群稳定，应停止使用疫苗。
2) 在疫苗使用过程中，坚持只用一种蓝耳苗毒株，且使用活苗，当猪群有波动不稳定时，也不应该更换蓝耳苗毒株，目的使猪场内部只有一种疫苗毒株。
3)蓝耳抗原监测过程中，一旦有阳性，必需测序，鉴别野毒、疫苗毒，野毒感染猪只必须淘汰，抗原检测采用荧光定量RT-PCR。
4)当使用疫苗后，定期监测半年后，基本无野毒感染，且猪群稳定，可考虑停止打苗，改用血清驯化。
5) 在蓝耳净化过程中，由于母猪未打蓝耳苗，保育育肥阶段无抗体，容易出现蓝耳隐性感染猪只发病、蓝耳爆发，需特别注意该阶段蓝耳的监测，并配合保健方案。蓝耳阳性血清保存，以备后续血清驯化用。
6)基于蓝耳苗带毒时间长，在打蓝耳苗过程中，即使普免（一刀切），也要避开怀孕期母猪。
7)蓝耳净化成功后，产房仔猪蓝耳抗原抗体双阴性，生物安全需特别重视。在驯化后产生第一批蓝耳双阴性仔猪进入保育舍前，需对保育舍全部清群并彻底消毒。
8)在使用血清驯化前，一定要严格检测血清不带有非洲猪瘟、伪狂野毒、圆环、 猪瘟等病毒，防止疾病传播。
2. PRRS净化目的
一是在猪群中建立本猪场蓝耳毒株的优势生态种群，净化野毒；二是后备猪同时感染同时消失，使后备猪同时接触本场蓝耳毒株，猪体内蓝耳病毒几乎同时消失；三是使后备猪接触本场蓝耳毒株，激活免疫系统，防止后期感染；四是使本猪场猪群健康水平稳定，提高生产成绩；五是一旦猪场健康稳定，停止使用蓝耳苗；六是没有易感动物存留以使病毒延续。
3. 种公猪
种公猪不打蓝耳苗，做好生物安全。若公猪之前有打蓝耳苗，而且猪群稳定，可慢慢减少免疫次数（公猪一般普免），直至不打蓝耳苗。种公猪必须实施头头检验，保证蓝耳病抗原阴性并直至抗原抗体双阴性。种公猪站最好远离母猪场，采有高效空气过滤公猪舍，人员管理与母猪场相对分开。
4. 种母猪（含后备母猪）
引种是PRRS防控的重中之重。首先根据不同母猪场规模大小，一次性准备6个月的后备母猪进群。然后实施封群驯化（包括血清驯化和疫苗驯化）。
血清驯化：通过驯化前期工作，掌握本场蓝耳流行毒株，采集本场经抗原检测蓝耳阳性猪只血清，定量分析，根据定量结果用PBS或生理盐水稀释（通常1:100），制备好驯化用血清后1 ml接种后备猪（接种前一天注射长效抗生素，或通过饲料提前一周抗生素保健）；封群6个月，接种后7天定期观察猪只精神状态、有无发热等症状，多维饮水保健，6个月内禁止引入其他猪只；对于寻找蓝耳抗原阳性猪只平时多留意发热育肥猪和保育猪，有疑似蓝耳症状采血检测以备驯化用。
疫苗驯化：当该猪场第一次做蓝耳净化，而且一直有打蓝耳苗时，建议使用疫苗驯化。后期猪场稳定后，可改用血清驯化。疫苗驯化步骤与血清驯化相同。
5. PRRS净化过程中产房仔猪监测
由于产房仔猪采血应激大，唾液不好采。可收集阉公睾丸液和断尾液体（图1），检测蓝耳抗原及其他病原，监测是否有母猪垂直传播感染。
图1 阉割睾丸和断尾液体
6. PRRS净化过程中保育监测
在血清（或疫苗）驯化的2-4个月内每周要多配10%-30%的母猪（根据实际影响调整）。驯化后12周开始检测断奶仔猪，连续测8周（5000头母猪场，一周240窝，2400-2500头仔猪，测30窝，每窝2头，共60头仔猪的检测量），如果批批阴性，那么证明母猪群已经稳定，产出阴性仔猪。配合实施保育舍清群。母猪群继续封群至200天，此时母猪群就完全净化了蓝耳病。
保育舍清群要点：
一是清空保育阶段的猪群，旨在把易感动物全部清走；
二是按照相关标准规范，消灭环境中的病原体：清扫猪舍一定要高标准严要求，做好有机物的清除和猪舍的消毒工作。建议：在喷消毒剂前，先用70～80℃的热水进行清洗，中间要进行一次熏蒸消毒。
三是空栏时间要足够长，2周左右，最低不少于10天。依据季节和当地的气候进行相应调整，特别是潮湿寒冷的季节要延长空栏时间。
7. PRRS净化过程中育肥监测
定期在保育中期和育肥中期采集唾液或血清检测蓝耳病毒，阳性样品测序鉴定是野毒还是疫苗毒。整个猪场，所有蓝耳阳性血清都要保存于-80度冰箱，以备后续血清驯化用。
8. PRRS净化总体技术路线
四、PRRS防控前瞻性研究
前面讲到PRRSV 疫苗效果不理想。基于病毒摧毁免疫系统，类似HIV，很难开发出安全性好、免疫效果好的疫苗。因此，通过抗病育种的方式培育抗病猪新品系可能是未来防控PRRS的重要方向。2021中央一号文件指出，尊重科学，严格监管，有序推进生物育种产业化应用，加强育种领域知识产权保护。提示培育抗PRRSV基因编辑猪具有潜在的应用价值。
本人及所在团队通过与河南牧原食品股份有限公司、广东壹号食品合作，培育出CD163-LBP缺失、抵抗高致病性PRRSV毒株感染的基因编辑猪（图2、3）。该编辑猪是目前对CD163基因片段删除最少的，以最大限度地保留其生物学功能，相当于对其做了一个最小的手术。目前生长良好，正在进行经济性状、免疫性状、生物安全、育种价值等分析和评估，以期培育抗病猪新品系并产业化应用，使猪天然抵抗PRRSV感染，无需接种疫苗和使用药物，真正做到从根本上解决PRRSV对生猪养殖的影响。
图2 CD163-LBP基因编辑两广小耳花猪和大白猪
图3 CD163-LBP基因编辑猪抵抗高致病毒株JXA1感染
作者简介
郭春和，中山大学特聘研究员，致力于PRRSV研究。主持国家自然面上项目（2项）、青年项目（1项）、广东省基金重点项目（2项）等10项课题，以第一或独立通讯作者在PLoS Pathogens、Journal of Virology等期刊发表16篇SCI，以第一发明人（或导师第一本人第二）获授权国家发明专利9项（转让1项），获全面百名优秀博士后等奖项。
