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[发明公布] 基因缺失的减毒非洲猪瘟病毒及其作为疫苗的应用

申请人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

本发明涉及可作为疫苗的基因缺失减毒非 洲猪瘟病毒及疫苗以及构建方法。本发明采用非 洲猪瘟中国流行株Pig/CN/HLJ/2018，经基因工 程技术，将非洲猪瘟病毒的毒力基因缺失，获得 MGF360-505R缺失和CD2V与MGF360-505R联合缺失的基因缺失病毒。经实验表明所述两种毒株均能提供对非洲猪瘟中国流行强毒株的100％免疫保护，可作为安全和有效的防控中国非洲猪瘟疫情的疫苗，具有极大的社会价值。

本发明获得的基因缺失的减毒非洲猪瘟病毒具有下述优势：

本发明构建的两株基因缺失非洲猪瘟病毒(rASFVΔ360-eGFP和rASFVΔCD2V/360-eGFP-mCherry) 在免疫猪 后，即使105TCID50剂量免疫组动物均无体温升高等临床症状，血液和脏器病毒分离均为阴 性，存活率均为100％，表明其充分致弱，作为疫苗是非常安全的，且均优于国外基因II型 ASFV的类似研究[Borca，M .V .，et al .，Deletion of a CD2-like gene，8-DR，from African swine fever virus affects viral infection in domestic swine .J Virol， 1998 .72(4)：p .2881-9；O′Donnell，V .，et al .，African Swine Fever Virus Georgia Isolate Harboring Deletions of MGF360 and MGF505 Genes Is Attenuated in Swine and Confers Protection against Challenge with Virulent Parental Virus .J Virol，2015 .89(11)：p .6048-56 .](表1)：国外采用我国流行株同源性极高的Georgia株 构建了MGF360-505R基因缺失病毒，在免疫猪后的血液病毒分离阳性率在60％ 以上；采用 基因II型Malawi Lil-20/1株构建的CD2V单基因缺失病毒，在免疫猪 后血液病毒分离阳性 率为100％、存活率仅为0％。其次，在有效性方面，强毒攻击后，本发明构建的rASFVΔ360- eGFP和rASFVΔCD2V/360-eGFP-mCherry免疫保 护率均为100％，血液病毒分离阳性率分别 小于35％和100％，但在第21-22天均 转为阴性，表明两株病毒都具有极佳的免疫保护效 力，也明显优于国外采用基因 II型ASFV的类似研究[Borca，M .V .，et al .，Deletion of a CD2-like gene，8-DR，from African swine fever virus affects viral infection in domestic swine .J Virol，1998.72(4)：p.2881-9；O′Donnell，V.，et al .，African Swine Fever Virus Georgia Isolate Harboring Deletions of MGF360 and MGF505 Genes Is Attenuated in Swine and Confers Protection against Challenge with Virulent Parental Virus .J Virol，2015 .89(11)：p . 6048-56 .](表1)：国外MGF360-505R缺失 Georgia株病毒免疫猪在攻毒后的血 液病毒分离阳性率为70％[O′Donnell，V .，et al .， African Swine Fever Virus Georgia Isolate Harboring Deletions of MGF360 and MGF505 Genes Is Attenuated in Swine and Confers Protection against Challenge with Virulent Parental Virus .J Virol，2015 . 89(11)：p .6048-56](其中，本发明采用 的103TCID50免疫剂量小于国外的104 HAD50，但攻毒后血液病毒分离阳性率仅为25％)；虽然本发明构建的 MGF360-505R和CD2V双基因缺失病毒免疫猪在攻毒后血液病毒分离阳性率 为 100％，略差于MGF360-505R基因缺失的病毒，但显著优于CD2V单缺失的基因 II型 Malawi Lil-20/1株病毒(免疫后死亡率100％)[Borca，M .V.，et al .，Deletion of a CD2- like gene，8-DR，from African swine fever virus affects viral infection in domestic swine .J Virol，1998 .72(4)：p .2881-9]，且攻毒后21天血液病毒分离就转为阴 性。最后，本发明构建的两株基因缺失病毒免疫后21天就能够提供充分的强毒攻击保护， 优于国外的28天[O′Donnell，V .，et al .，African Swine Fever Virus Georgia Isolate Harboring Deletions of MGF360 and MGF505 Genes Is Attenuated in Swine and Confers Protection against Challenge with Virulent Parental Virus .J Virol， 2015 . 89(11)：p .6048-56]。因此，采用流行地区的分离株来构建非洲猪瘟基因缺失减毒疫苗是最佳策略，也是中国研制非洲猪瘟疫苗的关键。因此，本发明构建的基因缺非洲 猪瘟病毒(rASFVΔ360-eGFP和rASFVΔCD2V/360-eGFP-mCherry)具有 巨大的应用价值。

[0023] 注：“-”表示未攻毒(由于该毒株免疫就已经导致猪全部死亡)。

[0024] 其中的保藏信息：本发明基于CN/HLJ/18株的MGF360-505R基因缺失的具 体病毒， 和CD2V与MGF360-505R联合缺失的基因缺失的具体病毒已于2019年 4月11日进行专利程序保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号分别是CCTCC NO：V201925和CCTCC NO：V201924。

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相关链接：非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗构建和免疫保护特性研究，可作为疫苗候选株